Биологически активная композиция для регулирования процесса липолиза в организме при ожирении

Резюме

Цель исследований - изучение механизма межмолекулярного взаимодей­ствия аллицина и лецитина с панкреатической липазой, а также разработка состава композиции, способствующей инактивации процесса липолиза и умень­шению усвоения жиров в живом организме. Методами компьютерной химии выполнено моделирование пространственных структур аллицина и лецитина. Осуществлена геометрическая оптимизация, изучены квантово-химические характеристики и распределение плотности заряда молекул исследуемых биологически активных веществ и панкреатической липазы. При исследова­нии молекулярных свойств липазы панкреатического сока человека до и после молекулярного докинга установлено, что 1 молекула лецитина недостаточно полно блокирует активный центр фермента. Для полной инактивации липазы требуются 2 молекулы лецитина или 1 молекула аллицина (Epot. = -412,36 и -159,4 ккал соответственно). Установлен оптимальный композиционный состав добавки для блокировки панкреатической липазы: аллицил-содержащая добав­ка - 95% (75% подсолнечного масла, 25% измельченного чеснока), лецитин -5%. Изучена эффективность инактивации липазы добавкой, хранившейся при 2-4 °С в составе жироводной смеси, установлено, что после хранения в течение 3 сут разработанная композиция сохраняет свои свойства. Кислотное число жира, подвергнутого ферментативной обработке, изменяется незначительно (с 0,1 до 0,25 мг КОН/г). Перекисное число и микробиологические показатели исследуемой фракции также не превышали допустимых норм. При оценке биологической ценности разработанной композиции установлено, что ее исполь­зование в составе высокожирового (19%) рациона белых мышей линии BALB/c с исходной массой тела 20-30 г (в дозе 6% от жирового компонента рациона) с 15 по 40 сут эксперимента снижает прирост массы тела в 1,5 раза по срав­нению с животными, не получавшими добавку, уменьшает содержание в крови общих липидов, холестерина, триглицеридов и глюкозы, повышает уровень общего белка и мочевины до уровня особей контрольной группы (без ожирения), находившихся на общевиварном рационе.

Ключевые слова:липаза, лецитин, аллицин, молекулярные свойства, комплексные соединения, молекулярный докинг

Вопр. питания. 2017. Т. 86. № 6. С. 74-83.

Адекватная диетотерапия способствует оптималь­ному течению процессов адаптации и компенсации нарушенных функций, коррекции патологически изме­ненных звеньев метаболизма, достижению иммуномодулирующего, антиоксидантного и других положитель­ных эффектов [1]. По оценкам специалистов в области медицины и питания, возможность воплощения в пов­седневную жизнь принципов здорового питания позво­лила бы снизить уровень смертности от сердечно-сосу­дистых заболеваний на 25%, онкологии - на 20-30%, диабета - на 50%. Избыток в рационе жиров, углеводов, недостаток полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) и пищевых волокон может привести к патологичес­ким состояниям, связанным с ожирением. Избыточная масса тела повышает риск развития гипертонии, ате­росклероза, сахарного диабета, остеопороза, болезней желчевыводящих путей, онкологических заболеваний и др. [2, 3].

Одной из проблем здравоохранения в промышленно развитых странах стало ожирение, которое в настоящее время приобретает угрожающие масштабы из-за развития сопутствующих заболеваний. В России ожирение также занимает одно из первых мест среди алимен­тарно-зависимых патологий. По последним данным, в России 25% лиц трудоспособного возраста имеют разную степень ожирения и 30% - избыточную массу тела [2, 3].

На практике эффективность лечения ожирения с использованием голодания и различных диет остается низкой. Клинические исследования показывают, что в первые сутки недостаток калорий компенсируется за счет запасов гликогена, затем процесс получения глюкозы обеспечивается за счет распада мышечных глюкогенных аминокислот (аланина, аспарагина, аспарагиновой кислоты). Поэтому до 30% снижения массы тела приходится на мышечную ткань, на место которой по окончании голодания и использования сильно реду­цированной диеты приходит жировая ткань. В 95% слу­чаев лечение ожирения приводит к кратковременному снижению массы тела и последующему ее увеличению [4-6].

Эффективной профилактикой при избыточной массе тела является использование в рационе питания биологически активных добавок к пище (БАД). Одно из направлений - это разработка рецептур и техноло­гий специализированных пищевых продуктов, содер­жащих биологически активные вещества (БАВ). При этом важное значение имеют химический состав сырья и правильно подобранное количественное соотношение компонентов, что позволяет регулировать функцио­нально-технологические свойства и пищевую ценность готовых продуктов, а также прогнозировать лечебно-профилактический эффект [7-9].

В результате анализа литературы были выявлены ин­гредиенты, обладающие биологически активными свойс­твами, которые могут быть использованы в рецептурах функциональных и специализированных пищевых про­дуктов для диетического (профилактического) питания, предназначенных для лиц с избыточной массой тела: аллицин (содержащийся в чесноке), растительное масло с высоким содержанием ПНЖК и лецитин [10-12].

Известно, что нарушение целостности зубка чеснока приводит к разрушению клеток и взаимодействию кле­точных компонентов, при этом из аллиина образуется БАВ - аллицин. Аллицин находится в цитозоле и является инертным химическим компонентом, он преобразуется в аллицин ферментом аллиназой, которая находится отдельно от аллиина в вакуолях и при повреждении (дроблении, измельчении и др.) растения вступает во взаимодействие со своим субстратом [13, 14]. Алли­цин обладает противомикробной активностью, снижает синтез триглицеридов в печени и уровень холестерина в крови, вступая в реакцию со свободными радикалами, нейтрализует их. Также имеются данные, что аллицин блокирует различные ферменты [14, 15]. Аллицин - это соединение, имеющее невысокую термическую ста­бильность. Он медленно разрушается при комнатной температуре и крайне быстро в процессе нагревания. В растворах растительных масел аллицин способен сохранять свои свойства очень длительный период вре­мени [14, 16]. Нестабильность аллицина при тепловой обработке и в процессе хранения предполагает разра­ботку технологии подготовки чеснока к использованию в качестве источника БАВ при производстве специа­лизированных пищевых продуктов. Поэтому возникает необходимость стандартизации чеснока по содержанию аллицина.

Поскольку растительные масла способствуют повы­шению стойкости и сохранности полезных свойств ал­лицина, целесообразно предусмотреть использование в композиции сырья с высоким содержанием ПНЖК. Доказано, что ПНЖК как составная часть структуры клеточных и субклеточных мембран являются родо­начальниками многих жировых структур в организме человека. При недостатке ПНЖК нарушаются многие функции клеток организма. В подсолнечном масле находится значительное количество ПНЖК семейства ω-6 (примерно 65,7%) [17, 18].

Использование лецитина в питании обусловлено его способностью обновлять поврежденные клетки, оказы­вать антиоксидантное действие. Треть мозговых, защитных и изолирующих тканей, окружающих спинной и го­ловной мозг, состоит из лецитина. Недостаток лецитина может вызвать слабоумие, способствовать развитию болезни Паркинсона, рассеянного склероза и прочих нервных заболеваний [19, 20].

По данным литературы, аллицин (содержащийся в чесноке), растительное масло с высоким содержанием ПНЖК и лецитин [10-12, 20, 21] обладают многофункци­ональными лечебно-профилактическими свойствами, являются активаторами процессов метаболизма и липолиза, способны блокировать ферментные системы и положительно влиять на организм человека. Однако липотропные свойства и механизм снижения уровня ус­воения жиров в организме при использовании в питании выявленных БАВ недостаточно хорошо изучены.

Цели исследования - изучение механизма межмо­лекулярного взаимодействия аллицина и лецитина с панкреатической липазой, а также разработка состава композиции БАВ, способствующей инактивации про­цесса липолиза и уменьшению усвоения жиров в живом организме.

Материал и методы

В качестве материалов при проведении эксперимен­тальных исследований были использованы: лецитин с содержанием фосфолипидов не менее 97%; панк­реатин с липолитической активностью 4300 ед. ФИП; чеснок свежий (ГОСТ 33562-2015) и рафинированное подсолнечное масло (ГОСТ Р 52465-2005).

Уровень рН (8-9) жироводной смеси для обеспечения оптимального действия липазы регулировали 0,1 N рас­твором NaOH.

Экспериментальные исследования проводили с при­менением стандартных методов титриметрического оп­ределения кислотного и перекисного чисел [21-23].

Определение аллицина в луковицах чеснока про­водили с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [24] изократическим эллюированием [эллюентом одного состава (в %) метанол : вода -50:50] при длине волны спектрофотометрического де­тектирования 220 нм в системе LC-20AD Prominence (Shimadzu, Япония). В качестве стандартного образца использовали аллицин 100% AllimaxTM ("CLM Health Group Inc.", Великобритания) [26].

Биологическую ценность и безопасность продукта оценивали на лабораторных животных - белых мышах, путем определения состояния белкового, углеводного и липидного обмена [25, 26]. Исследования прово­дили на белых мышах линии BALB/c (самцы и самки) с исходной массой тела 20-30 г. Животных содержали в клетках на подстилке из опилок при температуре около 20°С и стандартном режиме освещения в условиях ви­вария ФГБОУ ВО "Ставропольский государственный медицинский университет". Эксперимент проводили в соответствии с санитарными, санитарно-эпидемиоло­гическими, гигиеническими положениями, требованиями и правилами лабораторной практики [27-31]. Лабо­раторных животных разделили на 2 экспериментальные группы (1-й, 2-й опыты) и 1 контрольную по 5 особей в каждой. Животные опытных групп в течение 2 нед получали корм, обогащенный жирами - 19% от общего состава рациона. Затем в рационе животных 2-й группы использовали корм с разработанной добавкой. Масса ежедневного рациона для контрольной группы из 5 особей составляла 14,35 г [32]. На протяжении всего эксперимента (40 сут) 1-я группа получала корм, обогащенный жирами (без композиции), контрольная группа - стандартный рацион вивария (табл. 1).

Содержание в крови лабораторных животных общего количества липидов, холестерина, триглицеридов, общего белка вели на автоматическом биохимичес­ком анализаторе Cobas c 111 ("Roche Diagnostics", Швейцария).

Результаты исследований анализировали в приложе­ниях Statistic v. 8.0, 10 с использованием модуля Statistic Neural Networks. Опыты проводили в 3-5-кратной повторности. Достоверность полученных результатов конт­ролировали в модуле Error per Case, уровень значимости (р) в каждом опыте не превышал 0,05. Прогнозирова­ние молекулярных свойств химических соединений вели в приложениях HyperChem v. 8 и AutoDock v. 4.2.

Результаты и обсуждение

Одним из биологически активных компонентов БАД является аллицин, образующийся при нарушении це­лостности зубка чеснока. В России выращиваются раз­личные сорта чеснока: "Широколистный 220", "Сочин­ский 56", "Грибовский юбилейный", "Отрадненский", "Любаша", "Добрыня" и др. На юге России и в Ставро­польском крае (в Андроповском и Кировском районах) на промышленной основе выращивают в основном чес­нок сортов "Грибовский юбилейный" и "Любаша" [33]. Химический состав чеснока и содержание биологически активного ингредиента аллиина (предшественника ал­лицина) зависит от агротехнических приемов возделы­вания культуры, типа почв, погодных условий, а также от технологии переработки, хранения и др. Поэтому химический состав одного и того же сорта чеснока может отличаться в разные периоды времени и в зависимости от условий возделывания культуры.

На содержание аллицина исследованы образцы чес­нока свежего неподсушенного (после измельчения) сор­тов "Грибовский юбилейный" и "Любаша", выращенные в 2016 г. в Андроповском районе Ставропольского края. Хроматограммы содержания аллицина в чесноке пред­ставлены на рис. 1 (А, В).

В луковицах чеснока "Грибовский юбилейный" содер­жится 0,38% аллицина, а в сорте "Любаша" - 0,32%. В дальнейших исследованиях для оценки эффектив­ности композиции на лабораторных животных использо­вали сорт чеснока "Любаша" с меньшим содержанием аллицина.

Знание структуры, пространственной конфигурации, молекулярных свойств, плотности распределения за­ряда на поверхности реагентов и комплексных соеди­нений является важным этапом в понимании механизма взаимодействия активаторов процесса липолиза и БАВ, препятствующих новообразованию и усвоению жира. Оптимизация геометрии молекул в приложении Hyper-Chem предусматривает определение устойчивой конфи­гурации молекулярных структур с минимальной потен­циальной энергией системы. Молекулярные свойства липазы, лецитина и аллицина сведены в табл. 2.

Потенциальная энергия липазы, лецитина и аллицина имеет невысокие величины, что свидетельствует об ус­тойчивом состоянии исследуемых молекул. Среднеквад­ратичный градиент приближен к нулевому значению для всех молекул 0,1-0,19 ккал/(Ехмоль), что подтверждает эффективность минимизации потенциальной энергии. Дипольный момент характеризует полярность молеку­лярной системы.

Анализ образования комплексных соединений прово­дили в приложении AutoDock v. 4.2 методом молекуляр­ного докинга, который позволяет определить наиболее выгодную ориентацию молекул для образования ус­тойчивого комплекса. Комплексы данных биологически значимых молекул являются важным фактором в пере­даче химического сигнала. Относительное ориентиро­вание между двумя взаимодействующими молекулами влияет на тип произведенного сигнала (ингибирующий или каталитический).

В тонком отделе кишечника фермент липаза отвечает за расщепление нейтральных жиров - триглицеридов, сложных эфиров глицерина и высших карбоновых кислот. Возможность блокирования активного центра липазы позволит снизить интенсивность процесса гид­ролиза липидов, что будет способствовать выведению их из организма.

Исследование молекулярных характеристик липазы панкреатического сока человека до молекулярного до-кинга и после в присутствии лецитина представлено на рис. 2-4.

Результаты молекулярного докинга свидетельство­вали (рис. 3) о недостаточно хорошей блокировке актив­ного центра липазы одной молекулой лецитина - фермент продолжает выполнять каталитические функции. Поскольку образование комплексного соединения про­исходит вблизи активного центра, анализировали меж­молекулярное взаимодействие липазы с двумя молеку­лами лецитина (рис. 4).

Результаты компьютерного моделирования (рис. 4) взаимодействия панкреатической липазы с двумя мо­лекулами лецитина показали полную блокировку актив­ного центра фермента.

Предполагают, что подобным эффектом, свойствен­ным лецитину, обладает аллицин (рис. 5).

Компьютерное моделирование выявило эффективную блокировку активности липазы одной молекулой алли­цина (Epot. = -159,4 ккал) (см. рис. 5) или двумя молеку­лами лецитина (Epot. = -412,36 ккал) (см. рис. 5).

Исходя из данных по изучению активности липазы с лецитином и аллицином в качестве компонентов БАД для профилактики процессов ожирения использовали лецитин и аллицин-содержащую добавку (АСД). Ал­лицин относят к классу эфирных масел, он является нестойким соединением и легко разрушается в присутс­твии воды, образуя аллилдисульфид и SO2, но хорошо хранится в растительном масле, что обусловлено хими­ческой природой этого соединения [24]. В связи с этим АСД готовили путем измельчения чеснока и перемеши­вания его с растительным маслом в соотношении 1:3 для обеспечения стойкости аллицина.

Обоснование использования в питании БАВ базиру­ется на нормах физиологических потребностей в энергии и пищевых веществах для различных групп населения. Адекватный уровень суточного потребления лецитина (молекулярная масса 760,22 а.е.м.) - 7-15 г/сут; аллицина (молекулярная масса 162,28 а.е.м.) - 4-12 мг/сут [34]. На основании проведенного хроматографического анализа адекватный уровень суточного потребления аллицина содержится в 1,25-3,75 г чеснока сорта "Любаша".

Известно, что при гидролизе в желудочно-кишечном тракте фосфолипид лецитин распадается на высшие жирные кислоты, глицерин, фосфорную кислоту и холин. Однако в желудке человека расщепление липидов прак­тически невозможно. Это связано прежде всего с тем, что рН желудочного сока 1,5 не соответствует оптимуму действия фермента липазы, отсутствуют также условия для эмульгирования, а липаза может расщеплять жиро­вую фракцию только в форме эмульсии. Расщепление и последующее переваривание липидов происходит в тонкой кишке [35]. Учитывая тот факт, что моделирова­ние молекулярного докинга велось in vacuo (в вакууме), а образовавшееся соединение высокоустойчиво, пос­кольку потенциальная энергия комплекса гораздо ниже соответствующего показателя для панкреатической липазы (Epot. = -412,36 для комплекса липаза/лецитин против 4,97 ккал/моль), можно сделать вывод о высокой вероятности образования комплекса липаза/лецитин в желудке человека и малой вероятности его разрушения в тонкой кишке. Не связавшийся в желудке лецитин под­вергается гидролизу в тонкой кишке.

В обычном рационе холина (молекулярная масса 104,172 а.е.м.) содержится 500-900 мг. Верхний допусти­мый уровень потребления - 1000-2000 мг/сут для детей до 14 лет, 3000-3500 мг/сут для детей старше 14 лет и взрослых. Рекомендуемые уровни потребления холина: для взрослых - 500 мг/сут; для детей 4-6 лет - от 100 до 200 мг/сут; 7-18 лет - от 200 до 500 мг/сут [36], что эквивалентно 729,8-3649,0 мг/сут лецитина.

Следовательно, желательное соотношение компонен­тов лецитин : чеснок в БАД должно быть приблизи­тельно 1:1.

Для оценки эффективности блокировки липазы гомо­генизировали свиной шпик с водой в соотношении 1:1, добавляли АСД и лецитин, смесь подвергали термической обработке, затем нормализировали уровень рН и к полу­ченной остывшей композиции добавляли панкреатин.

Оценку эффективности разработанного состава БАД проводили на модельных липидных образцах (рис. 6).

1. Гомогенизированная жироводная (1:1) смесь (конт­роль).

2. Контроль с 0,3% лецитина.

3. Контроль с 2% АСД.

4. Контроль с 0,3% лецитина и 2% АСД.

5. Контроль с 6% АСД.

6. Контроль с 0,3% лецитина и 6% АСД.

Для оценки степени гидролиза липидной фрак­ции панкреатином в опытных образцах определяли кислотное число (КЧ). Эксперимент был разделен на 2 этапа. На 1-м этапе нагреванием имитировали процесс термической обработки при 72 °С (с учетом использования добавки при производстве мясопродук­тов, что обусловлено присутствием чеснока во мно­гих рецептурах мясных изделий); на 2-м - исследо­вали эффективность блокирования фермента липазы, для этого в состав композиции вносили 0,1% панкре­атина и выдерживали при 37 °С (оптимум действия липазы).

На 1-м этапе показатель кислотного числа (КЧ) жира изменялся незначительно (0,21-0,33 мг КОН/г жира). В образце с 0,3% лецитина и 6% АСД по истече­нии 2-часовой ферментативной обработки значение КЧ было самое низкое (4,86 мг КОН/г) по сравнению с 1-5-й композициями. Повышенная скорость гидроли­тического распада наблюдалась у образцов контроль­ного и с 2% добавкой АСД (3-й образец). По результатам проведенных исследований установлен состав БАД: АСД - 95% (75% подсолнечного масла, 25% измельчен­ного чеснока), лецитина - 5%.

Для оценки эффективности блокировки липазы, разработанной биологически активной композицией в составе продуктов, подвергающихся хранению, в жировую фракцию вносили 6% (Процентное соотношение установлено с учетом нормы потребления аллицина, восполнения недостатка лецитина и по результа­там изучения гидролиза липидной фракции в присутствии биологически активных добавок.) разработанной компо­зиции (что соответствует минимальному адекватному суточному потреблению аллицина - 4,56 мг и воспол­няет недостаток потребления лецитина на 0,3 г), затем в смесь добавляли эквивалентное количество воды, перемешивали и делили на 4 части. 2, 3 и 4-ю части выдерживали при 2-4 °С в течение соответственно 1, 2 и 3 сут. Образцы, полученные в момент изготовле­ния (1-я часть) и после хранения, термостатировали с панкреатической липазой при 37 °С в течение 30 мин, затем определяли показатели гидролитического рас­пада (КЧ), микробиологической и окислительной порчи (ПЧ) жировой фракции.

Показатели кислотного и перекисного (ПЧ) чисел жира анализируемых образцов, полученных в момент получения композиции и после хранения смеси, из­менялись незначительно: КЧ с 0,10 до 0,25 мг КОН/г; ПЧ с 1,2 до 1,5 ммоль активного кислорода/кг. Санитарно-микробиологические показатели (КМА-ФАнМ, бактерии S. aureus и группы кишечных па­лочек, патогенные микроорганизмы) не превышали допустимых норм (СанПиН 2.3.2.1078-01). Результаты проведенных исследований свидетельствовали о воз­можности хранения в охлажденном состоянии жиросодержащих пищевых продуктов с разработанной добавкой.

Для оценки биологической ценности разработанной композиции у экспериментальных животных (белых мышей) был смоделирован процесс ожирения повы­шением калорийности рациона за счет введения избы­точного количества липидов - 19% от общего состава рациона.

Изменение массы тела животных в ходе эксперимента представлено в табл. 3. Индивидуальные взвешивания вызывают стресс у животных, поэтому в первые 7 сут практически у всех животных наблюдался отрица­тельный или незначительный прирост: в контроль­ной группе среднее изменение массы тела составило -1,05 г, в 1-й опытной группе - +0,32 г, во 2-й опытной группе - +0,44 г.

Величина относительного прироста животных во 2-й опытной группе через 14 сут эксперимента была сопоставима с соответствующим показателем 1-й группы и превышала таковой в контрольной группе в 3,8-4,0 раза, что свидетельствует об эффективности моделирования процесса ожирения у животных за счет используемого рациона питания. При введении в лярд композиции БАВ в последующие 26 сут (период на­блюдения 15-40) во 2-й опытной группе наблюдалось снижение относительного прироста массы тела жи­вотных почти в 2 раза относительного прироста для 1-й опытной группы. Основной относительный прирост массы тела у животных 2-й опытной группы происходил с 1-х по 14-е сутки, когда в лярд не вводилась компози­ция БАВ. За весь период наблюдения (40 дней) относи­тельный прирост во 2-й опытной группе был в 1,5 раза ниже, чем в 1-й опытной группе.

Введение обогащенной жирами пищи приводило к увеличению в крови содержания липидов (в том числе триглицеридов и холестерина). Показатели крови у мышей 2-й опытной группы за счет использования в рационе БАВ не отличались от параметров животных контрольной группы (табл. 4).

При потреблении обогащенного жирами корма (без разработанной добавки - 1-й опыт) наблюдалось увели­чение в крови уровня глюкозы (табл. 5).

Обогащение рациона добавкой, содержащей АСД и лецитин, повышало в крови лабораторных живот­ных концентрацию белка и мочевины и снижало со­держание глюкозы до уровня контрольных животных (см. табл. 5).

Таким образом, использование в рационе разрабо­танной добавки нормализовало обмен белков, жиров и углеводов в организме животных с избыточной мас­сой тела.

Заключение

На основании компьютерного моделирования моле­кулярных свойств лецитина и аллицина и изучения их взаимодействия с панкреатической липазой обоснована целесообразность использования этих БАВ в композиции для уменьшения усвоения жиров в организме. Анализ норм потребления БАВ и экспериментальные исследова­ния на модели in vitro позволили обосновать состав био­логически активной композиции: аллицилсодержащая добавка - 95%, лецитин - 5%. Установлено, что у лабора­торных животных с искусственно вызванным ожирением, в рацион питания которых вводилась биологически ак­тивная композиция, содержание в крови общих липидов, холестерина, триглицеридов, общего белка, глюкозы и мочевины было приближено к соответствующим зна­чениям особей контрольной группы (без ожирения). Сле­довательно, использование биологически активной ком­позиции в рационе питания повышенной калорийности способствует нормализации липидного, углеводного и белкового обмена у лабораторных животных.

Литература

1. Тутельян В.А. О нормах физиологических потребностей в энер­гии и пищевых веществах для различных групп населения Рос­сийской Федерации // Вопр. питания. 2009. Т. 78, № 1. С. 4-15.

2. Аметов А.С., Курочкин И.О., Зубков А.А. Сахарный диабет и сер­дечно-сосудистые заболевания // РМЖ (Русский медицинский журнал). 2014. № 13. С. 958-943.

3. Бунина О.Ю. Разработка технологии мясопродукта для лиц с избыточной массой тела : автореф. дис. ... канд. техн. наук. Ставрополь, 2013.

4. Новодержкина Ю.Г., Дружинина В.П. Диетология. Ростов н/Д : Феникс, 2004. 384 с.

5. Балаков Н.А., Мазуров В.И. Ожирение. СПб. : СПбМАПО, 2003. 519 с.

6. Фалеев А. Голодание - это способ набора веса! [Электронный ресурс]. URL: http://www.faleev.com/slimming/slim/p009.html.

7. Мартинчик А.Н., Батурин А.К., Пескова Е.В., Кешабянц Э.Э. Михайлов Н.А. Потребление йогурта и снижение риска избыточ­ной массы тела и ожирения среди взрослого населения // Вопр. питания. 2016. № 1. С. 56-65.

8. Мартинчик А.Н., Батурин А.К., Кешабянц Э.Э. Фатьянова Л.Н., Семенова Я.А., Базарова Л.Б. и др. Анализ фактического пита­ния детей и подростков России в возрасте от 3 до 19 лет // Вопр. питания. 2017. Т. 86, № 4. С. 50-60.

9. Sadovoy V.V., Selimov M.A., Slichedrina T.V., Nagdalian A.A. Usage of biological active supplements in technology of prophilactic meat products // RJPBCS (Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences). 2016. Vol. 7, N 5. P. 1861-1865.

10. Ringseis R., Keller J., Eder K. et al. Role of carnitine in the regulation of glucose homeostasis and insulin sensitivity: evidence from in vivo and in vitro studies with carnitine supplementation and carnitine deficiency // Eur. J. Nutr. 2012. Vol. 51, N. 1. P. 1-18.

11. Селютина И. Ю. Биологически активные вещества видов рода Allium L. (Alliaceae) // Сиб. ботан. вестн. 2007. Т. 2, № 2. С. 79-86.

12. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М. : Медици­на, 2004. 704 с.

13. Hawkesford M., de Kok L. Managing sulphur metabolism in plants // Plant Cell Envirom. 2006. Vol. 29. P. 382-395.

14. Манукян К.А. Изучение биологически активных веществ листьев лука медвежьего (Allium ursinum L.) и создание лекарственного средства на их основе : дис. . канд. фарм. наук. Пятигорск, 2014. 150 с.

15. Suetsuna, K. Isolation and characterization of angiotensin I-converting enzyme inhibitor dipeptides derived from Allium sativum L (garlic) // J. Nutr. Biochem. 1998. Vol. 9, N 7. P. 415-419.

16. Heintalu, A., Sihvart, A. Vigala Sassi taimeravi. Tallinn : Pegasus, 2012. 326 p.

17. Ипатова Л.Г., Кочеткова А.А., Нечаев А.П., Тутельян В.А. Жиро­вые продукты для здорового питания. Современный взгляд. М. : ДеЛи принт, 2009. 395 с.

18. Паронян В. Технология жиров и жирозаменителей. М. : ДеЛи принт, 2006. 760 с.

19. Тимошенко Ю.А., Красильников В.Н. Лецитин в производстве функциональных жировых продуктов // Масла и жиры. 2007. №11. С. 14-15.

20. Сас Е.И. Перспективы использования синергетических взаи­мосвязей эссенциальных фосфолипидов (ЭФЛ) в структуре функционального питания // Материалы VII Всерос. науч.-практ. конф. "Синергизм пищевых добавок". СПб., 2006. С. 17-21.

21. Базарнова Ю.Г. Методы исследования сырья и готовой продук­ции. СПб. : НИУ ИТМО; ИХиБТ, 2013. 76 с.

22. ГОСТ ISO 3960 Жиры и масла животные и растительные. Опре­деление перекисного числа. Йодометрическое (визуальное) определение по конечной точке.

23. ГОСТ Р 50457-92 (ИСО 660-83) Жиры и масла животные и расти­тельные. Определение кислотного числа и кислотности.

24. Arzanlou M., Bohlooli S. Introducing of green garlic plant as a new source of allicin // Food Chem. 2010. Vol. 120, N 1. P. 179-183.

25. Стальная Л.И. Современные методы в биохимии. М. : Медицина, 1977. 392 с.

26. Уилсон К., Уолкер Дж. Принципы и методы биохимии и моле­кулярной биологии. М. : Бином Лаборатория знаний, 2015. 848 с.

27. СП 2.2.1.3218-14 "Санитарно-эпидемиологические требования к проектированию, оборудованию и обслуживанию эксперимен­тальных биологических клиник (виварий)".

28. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к продукции (товарам), подлежащей санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) (с изменениями на 10.11.2015).

29. Правила надлежащей лабораторной практики. Приказ Минздра­ва России от 01.04.2016 № 199n.

30. Требования Международного научного комитета по использо­ванию лабораторных животных в экспериментальных исследо­ваниях // Бюл. ИКЛАС. 1978. № 24. С. 4-5.

31. Приказ Минздрава СССР № 755 от 12.08.1977 "Правила работы с использованием подопытных животных".

32. Кырыкбайулы С., Садуов М.С., Малышев И.Л., Уразбекова Д.С., Жумагелдиев А.А. Лабораторное дело. Алматы, 2009. 270 с.

33. Сельское хозяйство, охота и лесоводство в России : стат. сб.. M. : Росстат, 2015.

34. МР 2.3.1.1915-04. Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ (утв. Главным государствен­ным санитарным врачом РФ 02.07.2004 г.). М. : Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благо­получия человека, 2004.

35. Тютюнников Б.Н. Химия жиров. М. : Колос, 1992. 448 с.

36. Методические рекомендации MP 2.3.1.2432-08 "Нормы физио­логических потребностей в энергии и пищевых веществах для различных групп населения Российской Федерации" : утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 18.12.2008. М. : Роспотребнадзор, 2009.