Среди самых распространенных патологий, приводящих к преждевременной старости, инвалидности и смертности, сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) стоят на первом месте [1, 2]. Для борьбы с болезнями сердечно-сосудистой системы прежде всего требуется разработать эффективные методы профилактики и коррекции основных факторов риска ССЗ: низкой физической активности, ожирения, повышенного артериального давления, курения. Особое место в этом аспекте занимает здоровое питание, в частности коррекция нарушений липидного обмена.
Обследование отдельных групп населения, у которых значительную часть рациона составляют морепродукты, богатые полиненасыщенными жирными кислотами (ПНЖК) семейства ω-3, показало, что они гораздо реже страдают болезнями кровообращения. Регулярное употребление рыбы жирных сортов снижает риск смерти от ишемической болезни сердца на 36% и общую смертность от ССЗ на 17% [3]. Оказывая гипокоагуляционное, антиагрегатное, противовоспалительное действие, ПНЖК семейства ω-3 способствуют профилактике и лечению гипертонической болезни, ишемической болезни сердца, атеросклероза.
Синтез длинноцепочечных ω-3 ПНЖК происходит очень медленно, а при старении и некоторых болезнях у человека полностью теряется способность синтезировать эйкозапентаеновую (ЭПК) и докозагексаеновую кислоты (ДГК) из α-линоленовой кислоты, потребляемой с пищей. Необходимо учитывать и то, что ω-3 и ω-6 ПНЖК, поступая в организм с пищей, конкурируют в реакциях за ферменты: десатуразы и элонгазы. Поэтому значительное количество ω-6 ПНЖК, поступающих с растительными маслами, нарушает образование ЭПК и ДПК в организме человека [4]. Установлено, что ЭПК и ДГК содержатся в большом количестве в планктоне и, соответственно, в рыбе и мясе морских животных, питающихся фито- и зоопланктоном, рыбой. Удовлетворение потребности населения в ПНЖК семейства ω-3 только за счет употребления в пищу продуктов морского происхождения, их содержащих, практически невозможно. Поэтому ученые активно исследуют пути обогащения рациона питания ω-3 ПНЖК.
Основной проблемой эффективного и широкого использования биологически активных липидов является разработка способов их введения в пищевые системы для лучшего усвоения организмом. Жирные кислоты являются жирорастворимыми соединениями, для которых необходим соответствующий транспортный носитель. Липотропные биологически активные вещества в пищевом сырье чаще всего упакованы в плотные структуры. В рыбе ЭПК и ДКГ содержатся не в чистом виде, а в составе фосфолипидов клеточных мембран. Такая плотная упаковка предотвращает разрушение длинноцепочечных ω-3 кислот при кулинарной обработке. В связи с этим М.И. Гладышев [5] рекомендует употреблять в пищу мясо рыбы, а не выделенный из нее жир.
Одной из форм уникальных мембранообразующих конструкций для "плотной упаковки" липотропных веществ являются липосомы. Фосфолипиды мембраны липосом после введения в организм вступают в обменные процессы и не накапливаются в организме. Липосомы рассматриваются как перспективная форма для доставки биологически активных веществ к клеткам и тканям [6]. С помощью липосом может быть обеспечена не только доставка полезных для организма липидов, из которых состоит липосомальная мембрана, но и других веществ, транспортируемых липосомами [7].
Цель данного исследования - получение концентрата ПНЖК в липосомальной форме и разработка возможных путей использования концентрата ПНЖК при производстве функциональных пищевых продуктов.
Материал и методы
Для получения концентрата ПНЖК был выбран метод комплексообразования с мочевиной [8], который считается экономичным, надежным, наиболее эффективным и экологичным приемом для получения концентратов ω-3 ПНЖК [9]. Подробное описание получения концентрата ПНЖК приведено в работе [10].
Для получения липосом использовали фосфолипиды из печени нерпы, выделенные двойной экстракцией смесью хлороформ:метанол (1:2) по методу, предложенному М. Кейтсом [11]. Липосомы получали из фосфолипидов с добавлением концентрата ПНЖК путем выпаривания органического растворителя из раствора липидов до образования тонкой липидной пленки с добавлением к ней буферного раствора и последующим экструдиро-ванием полученной эмульсии [12]. Для предотвращения процессов окисления ПНЖК применяли антиокислитель α-токоферола ацетат [13]. Более детальное описание получения липосом с концентратом ПНЖК было описано в работе [14].
Размеры липосомальных частиц определяли методом турбидиметрии [15]. Метод спектротурбидиметрии основан на теории рассеяния света шарообразными частицами и базируется на анализе уравнения Ангстрема, связывающего мутность системы (τ) и длину (λ) волны, при которой ведутся измерения. Оптическую плотность растворов липосом определяли относительно воды с помощью спектрофотометра "КФК-2" ("Загорский оптико-механический завод", РФ) в кюветах с толщиной слоя 10 мм в диапазоне длин волн от 400 до 750 нм.
Жирнокислотный состав образцов жира нерпы и концентрата ПНЖК был определен методом газожидкостной хроматографии с использованием хромато-масс-спектрометра 5973/6890 NMSD/DS ("Agilent Technology", США). Для разделения использовали капиллярную колонку HP-INNOWAX (30 м х 250 мкм х 0,50 мкм) Неподвижная фаза - полиэтиленгликоль. Подвижная фаза -гелий, скорость потока газа 1 мл/мин. Температура испарителя 250°С, источника ионов 230°С, температура линии, соединяющей хроматограф с масс-спектрометром, 280°С. Диапазон сканирования 41-450 а.е.м. Объем вводимой пробы 1 мкл, разделение потоков 5:1. Хроматографический анализ выполняли в изократическом режиме при 200 °С. Регистрацию проводили по полному ионному току (режим SCAN).
Медико-биологические исследования проведены на 30 половозрелых крысах-самцах линии Вистар с исходной массой тела 130-150 г, полученных из питомника НИИ биофизики ФГБОУ ВО "Ангарский государственный технический университет". Предварительно все животные, используемые в эксперименте, получали обычный рацион вивария и воду ad libitum. Животные содержались в виварии в соответствии с Санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник от 06.04.1993. Исследования были проведены в соответствии с Правилами лабораторной практики в Российской Федерации (GLP) (утв. приказом Минздрава России от 19.06.2003 № 267). Эвтаназию животных осуществляли путем декапитации под легким эфирным наркозом.
Экспериментальную гиперлипидемию у крыс вызывали согласно МУК 2.3.2.721-98.2.3.2, используя модель атерогенной гиперлипидемии с применением диеты, содержащей 5% холестерина (BioChemica, Applichem), 0,3% 6-метил-2-тиоурацила (Alfa Aesar), 1% холевой кислоты (Sigma) и свиное сало в количестве 5% от общей массы рациона животных взамен части зерновой смеси, в течение 21 дня.
Экспериментальные животные были разделены на 3 группы (по 10 особей в группе):
1-я группа - интактная (животные получали стандартный корм и воду);
2-я группа - контрольная (животные находились на атерогенной диете в течение 21 дня);
3-я группа - опытная (животные после 21-дневной атерогенной диеты получали в течение 14 дней перорально липосомальную суспензию с концентратом ПНЖК в дозе 20 мг на 1 кг массы тела).
Для оценки гиполипидемического действия концентрата ПНЖК в сыворотке крови крыс определяли содержание общего холестерина (ОХС), триглицеридов (ТГ), липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП). Биохимические исследования сыворотки крови животных были проведены с использованием стандартных реактивов ("Абрис+", РФ, "ДиаС", ЗАО "ДИАКОН-ДС", РФ-Германия) на автоматическом биохимическом анализаторе BS-400 ("Mindray", КНР).
Индекс атерогенности (ИА) у животных рассчитывали по формуле (1):
Полученный концентрат в липосомальной форме вносили в рецептуру хлеба пшеничного высшего сорта. Для приготовления хлеба использовали муку пшеничную высшего сорта по ГОСТ Р 52189-2003 [16]. Липосомальную суспензию концентрата ПНЖК вводили за счет замены части воды. Требуемое количество воды определяли расчетным путем, исходя из фактической влажности сырья, согласно ГОСТ 27669-88 [17]. Контрольный образец не содержал дополнительных ингредиентов. В опытные образцы добавляли концентрат ПНЖК в липосомальной форме, содержание которого в образцах (мг на 100 г муки) составляло в 1-м образце - 1800, во 2-м - 2400, в 3-м - 3000. Режимы замеса, брожения и выпечки соответствовали ГОСТ 27669-88 [17].
Жирнокислотный состав липидов хлеба определяли методом хромато-масс-спектрометрии на газовом хроматографе Agilent Packard HP 6890N (Agilent Technology, США) с квадрупольным масс-спектрометром HP MSD 5973N в качестве детектора. Для разделения метиловых эфиров жирных кислот использовали колонку HP-5MS с внутренним диаметром 0,25 мкм. Газ-носитель - гелий (постоянный поток 1,5 мл/мин). Температура колонки: 125°С (изотерма 0,5 мин), 125-320°С (7°С/мин, изотерма 0,5 мин), температура испарителя - 280°С. Объем пробы - 1 мкл раствора с разделением потока 40:1.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием программы Statistica 6.0.
Результаты и обсуждение
Жир нерпы содержит 17-19% насыщенных жирных кислот, 59-60% - мононенасыщенных, 22-23% - ПНЖК [18]. Анализ использованного в исследованиях жира нерпы показал, что содержание насыщенных жирных кислот составило 19,16%; мононенасыщенных - 59,62% и ПНЖК - 21,22%, что соответствует данным литературы.
В результате эксперимента из жира байкальской нерпы был получен концентрат ПНЖК, жирнокислотный состав которого представлен в табл. 1.
Как видно из данных табл. 2, в полученном концентрате увеличилось содержание мононенасыщенных (на 4,9%) и полиненасыщенных (на 6,9%) жирных кислот за счет уменьшения насыщенных жирных кислот (на 11,8%) по сравнению с природным жиром. Соотношение ω-6:ω-3 ПНЖК (1,3:1) указывает на высокую биологическую ценность полученного концентрата.
В качестве носителей ПНЖК были выбраны липосомы как одна из биодоступных систем инкапсулирования. Липосомы были получены из фосфолипидов печени нерпы методом экструзии, в качестве антиоксидантного фактора использовали α-токоферол [14]. Многослойные липосомы (МСЛ) изготавливали методом гидратации пленки фосфолипидов, в результате чего получаются мультиламеллярные везикулы [15]. Затем липидную эмульсию экструдировали через поликарбонатную мембрану с диаметром пор 100 нм на мини-экструдере "Liposomal Fast-Basic" ("AVESTIN", Канада). Принцип получения липосом при помощи экструзии заключается в том, что при продавливании суспензии многослойных липосом или липосом произвольного размера через поликарбонатные фильтры с порами определенного диаметра они разбиваются на частицы размера, соответствующего размерам пор. Продавливание осуществляли нечетное количество раз (19 раз), чтобы исключить присутствие частиц, не способных пройти через фильтр в конечном образце.
На следующем этапе исследований были определены размеры полученных липосом с концентратом ПНЖК. Средний диаметр полученных однослойных липосом определяли методом турбидиметрии, снимая спектр в интервале от 400 до 750 нм с разным разбавлением 1:4; 1:6; 1:8. Средний размер полученных липосом был в пределах от 144 до 158 нм.
Далее было проведено исследование биологической эффективности полученных липосомальных форм концентрата ПНЖК. Результаты представлены на рис. 1. В эксперименте у животных, получавших атерогенную диету (2-я группа), было установлено, что содержание ОХС сыворотки крови было повышено на 62%, содержание ЛПВП в сыворотке крови понизилось на 45,7% по сравнению с соответствующими показателями интактной группы. Уровень ЛПНП и ЛПОНП у животных контрольной группы повысился на 43,2 и 54% относительно 1-й группы. Уровень ТГ у животных в контрольной группе повысился на 40% по сравнению с таковым у интактных животных, а ИА увеличился в 7,3 раза.
Пероральное введение липосомальной формы концентрата ПНЖК, полученного из жира байкальской нерпы, способствовало значительному снижению в крови ОХС и восстановлению липидного профиля до показателей интактных животных. Полученные результаты свидетельствовали о выраженном гиполипидемическом эффекте исследуемой липосомальной формы концентрата.
На сегодняшний день одним из основных нарушений в пищевом статусе населения России является дефицит ПНЖК, главным источником которых служит пища морского происхождения. Особо необходимыми компонентами пищевого рациона являются ПНЖК семейств ω-3 и ω-6. Их наличие и, главным образом, соотношение определяют состояние липидного обмена, степень предрасположенности к ССЗ, нарушениям нервной и зрительной функций, аллергическим заболеваниям, развитию воспалительных процессов. Однако для основной массы населения является затруднительным регулярное включение рекомендуемых норм рыбных продуктов в рацион питания и употребление рыбьих жиров исходя из экономических возможностей и вкусовых предпочтений.
Наиболее быстрым, экономически приемлемым и научно обоснованным способом решения проблемы оптимизации питания населения является широкое применение биологически активных добавок и обогащенных пищевых продуктов. Однако получение биологически активных добавок к пище, содержащих ПНЖК, и функциональных пищевых продуктов, полученных на их основе, имеет свои трудности, связанные с органолептическими характеристиками и особенностями химического строения данных соединений. ПНЖК являются нерастворимыми в воде соединениями, и поэтому их можно ввести не в каждую пищевую систему. ПНЖК - легко окисляемые соединения, при работе с которыми необходимо предусмотреть наличие антиоксидантов, и, конечно же, введение функциональных ингредиентов не должно влиять на органолептические показатели пищевых продуктов.
Одним из наиболее употребляемых и доступных для широких слоев населения пищевых продуктов является хлеб. Ассортимент хлебобулочных изделий в России отличается огромным разнообразием, однако перечень функциональных продуктов в данном ассортименте довольно ограничен. В работе была предпринята попытка использования липосомальной формы концентрата ПНЖК для обогащения эссенциальными жирными кислотами хлеба пшеничного высшего сорта. Концентрат ПНЖК вводили в рецептуру хлеба пшеничного за счет замены части воды.
Было проведено исследование жирнокислотного состава полученных образцов. Жирнокислотный состав липидов хлеба, приготовленного с введением концентрата ПНЖК в липосомальной форме в различной концентрации, представлен в табл. 3 и 4.
Результаты проведенного исследования состава липидов, содержащихся в хлебе контрольных образцов (см. табл. 4), совпадают с подобными данными жирнокислотного состава хлеба, отмеченными и другими авторами [19].
С увеличением введения исследуемого концентрата в рецептуру хлеба пшеничного изменялось количественное содержание эссенциальных жирных кислот (см. табл. 3). Хлеб, приготовленный с добавлением липосомальной формы концентрата, содержал эйкозатриеновую кислоту, которая не была обнаружена в контрольном образце хлеба. В опытных образцах хлеба увеличилось содержание α-линоленовой кислоты в зависимости от дозы вводимого концентрата в 1,05, 1,26 и 1,55 раза по сравнению с контролем. Содержание ω-3 ПНЖК увеличилось в опытных образцах соответственно в 1,3, 1,9 и 3,2 раза по сравнению с контролем (см. табл. 4). При увеличении содержания ω-3 ПНЖК изменилось и соотношение ω-6 и ω-3 жирных кислот в полученных образцах. Данные наблюдения свидетельствуют о сохранности ω-3 ПНЖК в готовом продукте в процессе выпечки.
Анализ результатов мониторинга питания населения показывает, что ПНЖК поступают в организм в соотношении от 10:1 до 30:1. Очень важно, чтобы соотношение ПНЖК семейств ω-6 к ω-3 составляло не более 5-10:1 [20]. Как показали данные из табл. 4, хлеб с добавлением концентрата ПНЖК в липосомальной форме в количестве 3000 мг концентрата на 100 г муки имел соотношение ПНЖК ω-6:ω-3 - 5,8:1. Расчеты показывают, что употребление 100 г такого хлеба может удовлетворить суточную потребность человека в ω-3 ПНЖК на 19,1% (при общем содержании жира в хлебе 3,7%). Подобные данные были получены другими авторами [21].
Качество хлеба оценивали по объемному выходу хлеба и органолептическим показателям. Большое количество органолептических показателей затрудняет сравнительную оценку хлеба. В связи с этим использовали шкалу, где каждый показатель оценивался в баллах, которые затем умножались на коэффициент значимости [22].
Влияние введения липосомальной формы концентрата ПНЖК на объемный выход хлеба пшеничного высшего сорта (рис. 2) показал, что у 1-го образца объемный выход почти не изменился, тогда как объемный выход у 2-го и 3-го образцов увеличился на 6 и 14% соответственно по сравнению с контролем.
Увеличение объемного выхода хлеба, вероятнее всего, происходит за счет увеличения жирового компонента в рецептуре, так как известно, что жир, добавляемый в тесто, увеличивает объем хлеба примерно на 10% [23].
Органолептический анализ хлеба показал, что все образцы имели правильную куполообразную форму. Поверхность корок у всех образцов была гладкой, без пузырей, трещин и следов подрыва. Введение добавки изменяло цвет корки от светло-золотистой до темно-золотистой. Усиление насыщенности цвета корки хлеба при увеличении концентрации вводимой капсулированной формы ω-3 ПНЖК отмечали и другие авторы [19]. Контрольный образец хлеба имел очень мягкий, нежный эластичный мякиш, тогда как остальные образцы хлеба имели мягкий эластичный мякиш. С увеличением процента введения добавки аромат хлеба не изменялся, при этом посторонних ароматов не наблюдалось. Хлеб имел интенсивно выраженный хлебный вкус у контрольного образца и выраженный, характерно хлебный у исследуемых образцов хлеба.
Суммарное количество баллов контрольного образца составило 56, 1-й образец имел также 56 баллов, 2-й образец набрал 57 баллов и 3-й образец - 60 баллов. 3-й образец набрал наибольшее количество баллов из-за большего по сравнению с другими образцами объемного выхода хлеба и более интенсивной темно-золотистой окраски корок. Таким образом, хлеб пшеничный с добавлением в рецептуру концентрата ПНЖК в липосомальной форме оценивался выше, чем хлеб без добавления в рецептуру функционального ингредиента.
Заключение
В ходе работы получен концентрат ПНЖК из жира нерпы методом комплексообразования с мочевиной. Определен жирнокислотный состав полученного концентрата, в котором отмечено высокое содержание эссенциальных ПНЖК. Установлено, что в полученном концентрате соотношение ω-6:ω-3 ПНЖК составило 1,3:1. Методом экструзии получена липосомальная форма концентрата ПНЖК с добавлением антиоксиданта α-токоферола. Методом спектротурбидиметрии установлен средний размер липосом с концентратом ПНЖК, который составил от 144 до 158 нм.
Изучено гиполипидемическое действие липосомальной формы концентрата ПНЖК на животных, у которых экспериментально была вызвана алиментарная гиперлипидемия. Данные липидного профиля сыворотки крови подопытных животных показали, что получаемая ими перорально добавка снижала содержание ОХС, ЛПНП и ЛПОНП, при этом повышалось содержание ЛПВП до показателей интактных животных, что доказывает гиполипидемический эффект изучаемого концентрата.
Исследована возможность обогащения пшеничного хлеба эссенциальными жирными кислотами за счет замены части воды на липосомальную форму концентрата ПНЖК. Жирнокислотный анализ липидов хлеба показал, что при введении концентрата ПНЖК в липосомальной форме в количестве 3 г на 100 г муки содержание ω-3 ПНЖК в готовом продукте составило 191 мг на 100 г хлеба, соотношение ω-6:ω-3 ПНЖК составило 5,8:1.
Результаты исследования качества хлеба показали, что введение данной добавки в рецептуру увеличивает объемный выход хлеба, интенсифицирует окраску корок и не влияет на органолептические показатели качества хлеба.
Таким образом, хлеб с добавлением концентрата ПНЖК в липосомальной форме можно позиционировать как функциональный пищевой продукт, содержащий в 100 г готового продукта ω-3 ПНЖК в количестве 19,1% от суточной нормы потребления, а также соотношение ω-6 и ω-3 ПНЖК, близкое к оптимальному.
Литература
1. Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. Российские рекомендации (IV пересмотр). М. : Всероссийское научное общество кардиологов, 2009. 80 с.
2. Талицкий К.А., Карпов Ю.А. Препараты ω-3 полиненасыщенных жирных кислот как средство профилактики сердечно-сосудистых осложнений // Артериал. гипертензия. 2007. Т. 13, № 2. С. 160169.
3. Говорин А.В., Филев А.П. Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты в лечении больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями // Рационал. фармакотерапия в кардиологии. 2012. № 8. С. 95-102.
4. Гайковая Л.Б. Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты: лабораторные методы в оценке их многофакторного действия // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. 2010. Т. 8, № 4. С. 4-14.
5. Гладышев М.И. Незаменимые полиненасыщенные кислоты и их пищевые источники для человека // Журн. Сибир. федерал. унта. Биология. 2012. Т. 4, № 5. С. 352-386.
6. Akbarzaden A., Rogaie Rezaei-Sadabady, Soodabeh Davaran et al. Liposome: classification, preparation, and applications // Nanoscale Res. Lett. 2013. Vol. 8. P. 102-110.
7. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Липосомальные формы природных липидов. St Louis, Missouri : Publishing House Science and Innovation Center, 2015. 220 c.
8. Hayes D.G., Bengtsson Y.C., Van Alstine J.M., Setterwall F.N. Urea complexation for the rapid, ecologically responsible fractionation off fatty acids from seed oil // J. Am. Oil Chem. Soc. 1998. Vol. 75. P. 1403-1409.
9. Wanasundara U.N., Shahidi F. Concentration of omega 3-polyun-saturated fatty acids of blubber oil by urea complexation: optimization of reaction conditions // Food Chem. 1999. Vol. 65, N 1. P. 41-49.
10. Zhamsaranova S.D., Lamazhapova G.P., Syngeeva E.V. Development of a Method to produce a concentrate of polyunsaturated fatty acids // Biosci. Biotechnol. Res. Asia. 2014. Vol. 11. P. 59-64.
11. Кейтс М. Техника липидологии. М. : Мир, 1975. 236 с.
12. Bangham A.D., Horne R.W. Negative staining of phospholipids and their structured modification by surface agents as observed in the electron microscope // J. Mol. Biol. 1964. Vol. 8. P. 660668.
13. Fukuzawa K. Dynamics of lipid peroxidation and antioxidion of alpha-tocopherol in membranes // J. Nutr. Sci. Vitaminol. 2008. Vol. 19, N 8. P. 491-505.
14. Жамсаранова С.Д., Ламажапова Г.П., Сынгеева Э.В. Оценка про-и антиоксидантных свойств липосомальной формы концентрата ПНЖК // Материалы научно-практической конференции "Фундаментальные и прикладные аспекты биотехнологии". Иркутск : Изд-во ИРНИТУ, 2015. С. 208-215.
15. Сорокоумова Г.М., Селищева А.А., Каплун А.П., Швец В.И. (ред.). Фосфолипиды. Методы их выделения, обнаружения и изучения физико-химических свойств липидных дисперсий в воде. М. : МИТХТ, 2000. 68 с.
16. ГОСТ Р 52189-2003 Мука пшеничная. Общие технические условия.
17. ГОСТ 27669-88 Мука пшеничная хлебопекарная. Метод пробной лабораторной выпечки хлеба.
18. Аверина Е.С., Пинтаева Е.Ц., Раднаева Л.Д. Жирнокислотный состав подкожного жира байкальской нерпы разного возраста // Вестн. Бурят. гос. ун-та. 2009. № 3. С. 61-66.
19. De Conto L.C., Oliveira R.S.P., Martin L.G.P., Chang Y.K. Effects of the addition of microencapsulated omega-3 and rosemary extract on the technological and sensory quality of white pan bread // LWT Food Sci. Technol. 2012. Vol. 45. P. 103-109.
20. МР 2.3.1.2432-08. Нормы физиологических потребностей в энергии и пищевых веществах для различных групп населения Российской Федерации.
21. Байдалинова Л.С., Андронова С.В. Полиненасыщенные жирные кислоты рыбного сырья в технологии функциональных продуктов // Науч. журн. НИУ ИТМО. Сер. "Процессы и аппараты пищевых производств". 2014. № 3. С. 11-19.
22. Козлова Т.С., Марзаева М.Х. Методы исследования свойств сырья и продуктов питания растительного происхождения. Улан-Удэ : Изд-во ВСГУТУ, 2014. 146 с.
23. Хосни Р.К. Зерно и зернопереработка : пер. с англ. / под ред. Н.П. Черняева. СПб. : Профессия, 2006. 336 с.